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柱床塌陷和键合相塌陷的启事及处理计划

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2012-09-19 19:46

  柱床塌陷是指色谱柱应用一段时间后色谱柱进口处的柱床发生可见的闲暇。该闲暇的存在增大年夜了逝世体积,会招致色谱柱柱效降低。形成柱床塌陷的启事以下:其一,色谱柱填装时的压力太低,填装不严密,在高压下应用一段时间,末尾出现闲暇;其二,操作压力超越色谱柱填料的耐压值,招致填料颗粒破裂发生闲暇;其三,活动相消融填料招致闲暇出现。键合相塌陷是指因为活动相极性与键合相极性相差太大年夜,键合相没法在活动相中充沛舒展而倒伏、缠结在一同,比如通俗C18在纯水相条件下。相塌陷会招致色谱柱对化合物的保管缺少。

  硅胶外表的硅羟基(Si-OH)密度为8 μmol/m2,因为空间位阻的存在,硅烷化键合反应最多只能掩饰50%的硅羟基,超越一半的硅羟基是活性硅羟基。这些硅羟基与化合物的极性基团存在极性相互感化和离子交换感化,为化合物的保管添加了不被希冀的感化力,常常会影响峰形。用短链氯硅烷(如三甲基氯硅烷)键合活性的硅羟基,可以减小乃至消弭这类影响,这类操作被称为封端(Endcap)。

  封端处理的意义:

  为了改良剖析结果,某些操作需求延续修改活动相中各溶剂组分的比例以延续修改活动相的极性,使每个剖析组分都有适宜的容量因子k,并使样种类的一切组分可在最短时间内完成最好分别,这类洗脱方法称为梯度洗脱。

  梯度洗脱可不才列情况中发扬主要感化:

  下式为分别度计算公式

  

  N:柱效(Efficiency)反应色谱柱功用,柱效越高,分别度越好。在其他条件恒定的状况下,塔板数添加一倍,分别度仅提高40%。操作中,可经过下面两种方法添加塔板数进而提高分别度:其一,应用长柱或双柱串连,但也会使分别时间大年夜大年夜延长;其二,应用细粒径填料的色谱柱,但这需求耐更高压力的液相色谱系统。比拟之下后者更加可取。

  α:选择性(selectivity)是指色谱柱-活动相系统分别两个化合物的才华。选择性主要与固定相、活动相构成和柱温等要素有关,与保管值也亲密相干,个中固定相和活动相构成影响较大年夜。以最罕见的反相形式为例,反相柱(包罗C18、C8、PH等)是以分派感化对化合物停止保管的,不异化合物的分别是基于它们在键合相与活动相平分派系数的差异,假设两种化合物的水溶性、在烷烃-水系统的分派系数等方面存在清晰差异,那么这些化合物平日是可以应用反相柱到达分别;PH柱对具有苯环的化合物具有特别保管。正相形式下,硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互感化,对化合物的基团具有选择性,经经常使用于结构相似物、异构体化合物的分别。活动相方面,降低活动相的洗脱强度平日可以增大年夜分别度;而无机溶剂类型也会影响分别,比如反相条件下,乙腈和甲醇的选择性就存在很大年夜差异,这类差异需求在实际中探索,但不管若何,多种溶剂类型带给我们更多的完成分其余能够。


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